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LAB1

  • Pipetas P200, P20 e P10
  • Pontas amarelas, azuis e brancas estéreis, NOVOS
  • Eppendorfs 1.5 mL NOVOS
  • Marcadores
  • 4 caixas de esferovite para gelo
  • 4 tubos Eppendorf 2 mL com 1.8-2.0 mL tampão P1 (marcados "P1")
  • 4 tubos Eppendorf 2 mL com 1.8-2.0 mL tampão P2 (marcados "P2")
  • 4 tubos Eppendorf 2 mL com 1.8-2.0 mL tampão P3 (marcados "**P3")
  • 4 tubos Falcon 50 mL com ~20 mL etanol seco 99% (qualidade pura para DNA, marcados EtOH 99%)
  • 4 tubos Falcon 50 mL com ~20 mL etanol 70% (qualidade pura para DNA, marcados EtOH 70%)
  • 4 tubos Falcon 50 mL com ~20 mL Agua ultrapura estéril (4 tubos no total, marcados ddH2O)
  • 4 tubos Eppendorf com 1 mL tampão 1x TE (4 tubos no total, marcados 1xTE)
  • Suportes para Tubos Eppendorf
  • Microcentrifuga para tubos Eppendorf

Não é necessário preparar P1, P2 ou P3 de novo. Temos no LGM.

LAB2

PCR template for Template Primer1 Primer2
amp pBR322 1113 987
pBR pBR322 1196 1195
2µ YEplac195 984 983
LEU2d YIplac128 982 979
ΔCRP pYPKpw 978 977

  • PCR primers (5 µM) (see table above) volume >= 30 µL

  • 1.66 x colored PCR mastermix = 20 students * 25 µL 2xPCR mastermix * 1.2 + 20 * 8 µL 6x DNA loading buffer * 1.2 = 792 µL (33 µL for each 50 µL PCR reaction)

  • 6x DNA loading buffer ✅

  • DNA ladder✅

  • 1 tina de eletroforese (Bachman, LGM) ✅

  • Fonte de eletricidade ✅

  • 4 placas Petri quadrados

  • Barquinhos de pesagem (plástico, LGM)✅

  • Pontas amarelas, azuis e brancas estéreis, NOVOS

  • Eppendorfs 1.5 mL NOVOS

  • Tubos Falcon 50 mL (NOVOS, 1 saco)

  • Tubos PCR

  • 4 suportes para tubos Eppendorf

  • 4 suportes para tubos PCR

  • Microcentrifuga para tubos Eppendorf

  • 200 mL Agua ultrapura estéril num Schott 250 mL

  • 1 provetas 100 mL

  • 4 Erlenmeyers 100 mL

  • 4 Schotts 100 - 250 mL

  • Agar

  • Peptone ou Tryptone

  • Glucose

LAB3

  • 25 mL YPD culture with CENPK111-32D MATa URA3 HIS3 leu2-3,112 TRP1 MAL2-8c SUC2 (µ880) ✅ LGM
  • ~5-10 mL YPD for spectrophotometer✅ LGM
  • cuvettes usados
  • 4 Erlenmeyer estereis 250 - 500 mL com algodão
  • 4 Schotts 500 mL com tampa, não estereis
  • Yeast Nitrogen Base (YNB) WITHOUT AMINO ACIDS
  • Agar
  • Glucose
  • Agarose para geis (>4 g)
  • Tampão TAE x 1
  • Tampão stock TAE x 50
  • 1 proveta 1L (plastico)
  • 1 copo 2L (plastico)

LAB4

  • banho maria 42°C

  • 4 barcos para tubos eppendorf

  • Schott com 1/2 L agua ultrapura autoclavado

  • 1 saco com tubos FALCON 50 mL novos, estéreis

  • PLS 300 µL x 16 = 5 mL ✅ LGM

  • 1 tubo FALCON com ~10-20 mL de esferas de vidro (~5 mm) estéreis ✅ LGM

  • YPD medium ~30 mL ✅

  • Tubos Eppendorf novos

  • Pontas azuis, amarelas estéreis

  • suportes para tubos eppendorf

  • suportes para tubos FALCON 50 mL

  • microcentrífuga

  • Pipetas P1000, P200, P20

  • 4 caixas de esferovite

Preparation of an agarose gel (one for all groups)

EGB24-20240301092641520.png

  1. The four groups should make one 350 mL 0.8 % w/v agarose gel in 1 x TAE buffer together.
  2. Use the balance to weigh agarose in a small plastic weighing boat.
  3. Dilute 1x TAE buffer from the stock (x50) if necessary.
  4. Add agarose and 300 mL 1 x TAE buffer to an 1 L glass beaker.
  5. Heat the cup in a microwave oven for 5 x 1 min, stir with a glass pipette in between.
  6. Check so that the gel appears like water with no suspended particles.
  7. Wait for the gel to cool down.
  8. Pour the gel in the gel tray indicated by the teacher.

Make solid medium for transformation on LAB4 (one per group)

Each group should make 300 mL solid [SD]] medium in a 500 mL [Schott flask.

  • 6.7 g/L Yeast Nitrogen Base (YNB) WITHOUT AMINOACIDS
  • 20 g/L glucose
  • 20 g/L Agar for solid medium
  1. Put approx 100 mL dH2O in a 500 mL Schott flask
  2. Weigh all ingredients in plastic weighing boats (ingredients are dry powders).
  3. Add the ingredients to the flask and mix.
  4. Top up with water to 300 mL
  • 20 placas de Petri vazios (1 pacote)

LAB5

mastermix (LGM)✅:

  1. 20 * 20 = 400 µL 2xmastermix
  2. 20 * 2 µL = 40 µL 1222 (10 µM)
  3. 20 * 2 µL = 40 µL 1779 (10 µM)
  • 4 mL 20 mM NaOH in four Eppendorf tubes
  • 95°C heat block or water boiler
  • 4~5 mL TE buffer
  • PCR tubes
  • Eppendorf tubes (New)
  • blue, yellow tips

LAB6

  • Agarose gel ~20 wells
  • 6x DNA loading buffer
  • Tryptone or Peptone
  • Yeast extract
  • NaCl
  • Agar
  • Eppendorf tubes 2 mL (New)
  • blue, yellow tips
  • 4x Schott bottles (500 mL) w lid

LAB7

  • Liquid LB medium
  • 4 x Eppendorf tubes, 2 mL
  • Eppendorf tubes 1.5 mL
  • Blue, yellow tips
  • P1000, P200, P20 pipettes
  • Water bath 37°C
  • Glass beads, 5 mm
  • LB-amp plates

LAB8

  • Pipetas P200, P20 e P10
  • Pontas amarelas, azuis e brancas estéreis, NOVOS
  • Eppendorfs 1.5 mL NOVOS
  • Marcadores
  • 4 caixas de esferovite para gelo
  • 4 tubos Eppendorf 2 mL com 1.8-2.0 mL tampão P1 (marcados "P1")
  • 4 tubos Eppendorf 2 mL com 1.8-2.0 mL tampão P2 (marcados "P2")
  • 4 tubos Eppendorf 2 mL com 1.8-2.0 mL tampão P3 (marcados "**P3")
  • 4 tubos Falcon 50 mL com ~20 mL etanol seco 99% (qualidade pura para DNA, marcados EtOH 99%)
  • 4 tubos Falcon 50 mL com ~20 mL etanol 70% (qualidade pura para DNA, marcados EtOH 70%)
  • 4 tubos Falcon 50 mL com ~20 mL Agua ultrapura estéril (4 tubos no total, marcados ddH2O)
  • 4 tubos Eppendorf com 1 mL tampão 1x TE (4 tubos no total, marcados 1xTE)
  • Suportes para Tubos Eppendorf (4 grupos)
  • Microcentrifuga para tubos Eppendorf

Não é necessário preparar P1, P2 ou P3 de novo. Temos no LGM.

  • 5 mL Liquid LB medium in a 15 mL FALCON tube

LAB9

restriction digestion, gel electrophoresis