反转录试剂盒

1. 反转录体系（10 µl），冰上融。

⑤ Oligo dT	1 µl
④ dNTP Mixture	1 µl
Total RNA	5 µl
⑦ RNase free ddH20	3 µl

2. 短速离心，65℃水浴，5min，立即冰浴，2min

3. 短速离心，加入(冰上操作)

② 5×prime scnjit	4 µl
③ RNase Inhitor	0.5 µl
① Prime scnpt RNase	1 µl
⑦ RNase free ddH20	4.5 µl

4. 混合后离心，42℃恒温水浴，1h

5. 70℃保温15min，冰上冷却，-20℃保存

6. 测浓度，RNase free ddH20调零

7. cDNA验证-用内参进行PCR验证（10 µl）

2× Es taq酶	5 µl
ddH2O	2.8 µl
cDNA	1 µl
GAPDH/F	0.6 µl
GAPDH/R	0.6 µl

8. PCR程序(预计1.2h )

预热变性94℃	4min
模板变形94℃	30s	扩增循环30次
退火温度55℃	30s
延伸 72℃	30s
延伸保持72℃	10min

9. 1%琼脂糖电泳验证

500 Marker（5µl）