蓝莓果实RNA的提取：CTAB-KAc法

• 1.取蓝莓幼果材料0.1 ～0.2 g于研钵中，用液氮研磨成粉末状并快速转移至65℃预热的2ml离心管（含0.9mlCTAB提取液+30µl β-巯基乙醇）中，用涡旋震荡仪震荡均匀，于65℃水浴10min。期间颠倒混匀3次，水浴后4℃，12000r/min，5min。
• 2.取上清液（约600µl），加入1/3（200µl）体积的5M KAc溶液（PH=4..8），混匀后冰浴30min。
• 3.再加入700µl 氯仿：异戊醇（24:1）混合试剂，涡旋混匀，4℃，12000r/min，5min。
• 4.取上清液，加入500µl RNA提取酚试剂（PH5.2）,轻轻混匀。
• 5.再加入500µl 氯仿：异戊醇（24:1），涡旋混匀，4℃，12000r/min，5min。
• 6.取上清液（约500µl），加入等体积异丙醇，混匀后-80℃沉淀12min，4℃，12000r/min，5min。
• 7.去上清，加入90µl的DEPC水+10µl buffer（10×）+1µl DNAseⅠ,吹打混匀后，37℃水浴，8min。
• 8.再加入500µl DEPC水+400µl RNA提取酚试剂（加入后快速盖盖，轻轻混匀）+400µl氯仿：异戊醇（24：1）混合试剂，涡旋混匀，4℃，12000r/min，5min。
• 9.取上清液，加入等体积异丙醇，混匀后-80℃沉淀12min，4℃，12000r/min，5min。
• 10.去上清，加入1 ml 75%乙醇溶液洗涤沉淀2次，4℃，10000r/min，5min。
• 11.室温自然干燥3-5min，适量（15µl）DEPC水溶解，-80℃保存备用
• 12.取1µl ，NanoDrop2000C测定，记录浓度、A260/A280和A260/A230
• 13.1%琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整度。

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（注：A260/A280均为1.90 ～2.10，A260/A230都在 2.0以上，表明无蛋白质、酚类和多糖等污染）

CTAB法：试剂配制

1. 0.1%DEPC水（1L）

• 1ml DEPC溶于999ml蒸馏水中，通风橱内震荡摇匀30min，121℃，40min 灭菌后，烘干备用。

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（注： DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性最强，应做好保护工作，口罩、实验服、手套，DEPC高温灭菌后分解为乙醇和二氧化碳）

2. 1 mol/L Tris-HCl（PH 8.0）- DEPC水定容（100ml)

• Tris 12.144g
• DEPC水 80ml
• 浓HCl 调PH 4.2ml

3. 0.5 mol/L EDTA - DEPC水定容（50ml PH 8.0）

• EDTA 7.2g
• NaOH 调PH 1g
• DEPC水 40ml

4. 2mol/L NaCl- DEPC水定容(100mL)

• NaCl 11.7g

5. CTAB提取液-DEPC水定容(200ml)

• 20g/L CTAB——CTAB 4g
• 20g/L 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）——PVP 4g
• 1 mol/L Tris-HCl（PH 8.0）——20ml
• 0.5 mol/L EDTA——10ml
• 2 mol/L NaCl——3.376ml

6. 5M KAc溶液-DEPC水定容(PH 4.8，100ml)

• KAc 24.535g
• 冰乙酸 11.6ml

7. 5M KAc溶液-DEPC水定容(PH 5.2，100ml)

• 5M KAc（PH4.8） 60ml
• 冰乙酸 11.5 ml

8. 氯仿：异戊醇=24:1（200 mL）

• 氯仿（三氯甲烷）：192ml
• 异戊醇：8ml （4℃，避光保存）

9. 氯仿：异丙醇=24：1(200 mL)

• 氯仿（三氯甲烷）：192ml
• 异丙醇：8ml （4℃，避光保存）

10. 75%乙醇溶液-DEPC水配制（200mL）

• 150ml 无水乙醇
• 50ml DEPC水 （4℃，避光保存）

11. 50× TAE溶液-蒸馏水定容（100ml）

• 0.5M EDTA(PH 8.0) 10ml
• 冰乙酸 5.7ml
• Tris 24.2g

12. 1× TAE缓冲液-蒸馏水定容（1L）

• 50× TAE溶液 20ml
• 蒸馏水 980ml （4℃，避光保存）

1%琼脂糖凝胶电泳

1 制胶

• 小：琼脂糖 0.2g；1× TAE缓冲液 20ml
• 中：琼脂糖 0.4g；1× TAE缓冲液 40ml
• 大：琼脂糖 0.8g；1× TAE缓冲液 80ml

2 电泳

RNA:110V，30min