Sanger测序原理与峰图判读

更新：2026-10-13；状态：可用；验证范围：官方平台资料与原始研究核对；原理及判读，未执行湿实验或平台测序。

链终止产生不同长度产物，常见自动化读出转成峰图，混合信号需结合上下文。

一代测序中的位置

Sanger链终止是常见一代代表，历史上还有Maxam–Gilbert化学裂解法；现代“一代”讨论通常主要指自动化Sanger。

链终止核苷酸缺少正常继续延伸所需结构，使延伸在不同位置停止。产物按长度分离，常见自动化系统用荧光读取碱基并输出峰图和序列。

使用范围

适合有限目标片段确认和小范围验证，不直接替代高通量全基因组分析。可用长度和质量依模板、实验和仪器变化，宣传最长读长不是每个样本保证。

峰图判读

同时看峰图、质量区间、背景和比对，不只看输出字母。单点双峰可能与杂合或混合模板有关；indel后的持续混峰可能需要更复杂解释；弱峰、污染和非特异产物也可造成类似现象。

双向结果有助检查方向性问题，仍要统一正反链与参考坐标。等位基因脱落可能使真实杂合看似单峰；Sanger不自动确认所有低频变异。

保存与报告

保留AB1等峰图、方向、参考版本、可判读区间及不确定位置。验证需说明是否独立样本、是否同一PCR来源和低比例信号限制。本页没有峰图实测。

来源：Sanger等1977论文、官方峰图排查指南。证据边界见变异与群体分析的验证设计。