DNA与RNA样本质量及建库偏差

更新：2026-10-13；状态：可用；验证范围：官方平台资料与原始研究核对；原理及判读，未执行湿实验或平台测序。

浓度、完整性、纯度和可用分子数不同，建库进一步改变可观测对象。

质量不能用浓度代替

浓度衡量某种检测口径下的含量；完整性描述片段和损伤；纯度与抑制物影响反应；可用目标分子数还依赖来源与目标。某个吸光比或完整性指标合格，不保证所有测序任务都适合。

长分子测序对片段分布敏感，短片段也可能适合相应短读长或靶向任务。RNA完整性指标需结合物种、组织、保存和建库方式解释，不宜设置通用门槛。

建库产生的选择

打断、大小选择、逆转录、连接、捕获和扩增改变进入数据的分子。PCR-free可减少部分扩增问题，却不消除提取、连接或测序偏差。

poly(A)富集、rRNA去除、3′计数和小RNA建库观测对象不同；原生修饰能否保留也取决于复制、转换和读出。

交接信息

保存来源、批次、保存条件、输入质量、片段分布、建库和失败/重做记录。避免处理组与制备批次完全重合，不能只交FASTQ再猜实验条件。

下一步见RNA测序建库选择与偏倚和测序方案选型与实验设计。依据：MIQE 2.0、HiFi流程。